La solución salina tamponada con fosfato (PBS) es una solución tampón que se usa comúnmente para tinción inmunohistoquímica (IHC) y sus & amp; apos; s a menudo utilizados en la investigación biológica.& amp; amp; nbsp; PBS es una solución salina a base de agua que contiene hidrógeno y amp; amp; nbsp; fosfato, cloruro de sodio y, en algunos casos, potasio y amp; amp; nbsp; cloruro y dihidrógeno de potasio & amp; amp; nbsp; fosfato.
Mancha inmunohistoquímica & amp; amp; nbsp;
La inmunohistoquímica se refiere al proceso de detección de antígenos como proteínas y amp; nbsp; en las células de una sección de tejido utilizando el principio de anticuerpos que se unen específicamente a los antígenos en los tejidos biológicos. Inmunofluorescente & amp; amp; nbsp; la tinción fue el primer método de tinción inmunohistoquímica.
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Los antígenos se vuelven visibles y amp; amp; nbsp; cuando se conjuga con anticuerpos & amp; amp; nbsp; usando colorantes de fluorescencia debido a una reacción de unión antígeno-antibody. Este proceso ocurre cuando se activa & amp; apos; s con luz emocionante de una longitud de onda específica bajo un microscopio fluorescente.& amp; amp; nbsp;
The & amp; amp; nbsp; osmolarity & amp; amp; nbsp; y las concentraciones de iones de las soluciones coinciden con las del cuerpo humano & amp; # x2014; they & amp; apos; re isotónico.& amp; amp; nbsp;
Una receta para PBS & amp; amp; nbsp; Buffer
Puede preparar PBS de varias maneras. Hay múltiples fórmulas. Algunos de ellos no contienen potasio, mientras que otros contienen calcio o magnesio.& amp; amp; nbsp;
Esta receta es relativamente fácil. It & amp; apos; s para solución madre 10X PBS (0.1M). Sin embargo, también puede hacer una solución madre 1X, o comenzar con esta receta 10X y diluirla a 1X. & Amp; amp; nbsp; todo el proceso dura unos 10 minutos y también se proporciona una opción para agregar Tween.
Lo que usted & amp; apos; ll necesita hacer PBS Buffer
- Fosfato de sodio monobásico (anhidro)
- Fosfato de sodio dibásico (anhidro)
- Cloruro de sodio
- Escala y pesa botes
- Agitador magnético y barra de agitación
- Una sonda de pH que & amp; apos; s soluciones calibradas y apropiadas para ajustar el pH
- Matraz volumétrico de 1L
- Tween 20 (opcional)
Cómo hacer PBS Buffer
- Pesar 10.9 g de fosfato de sodio anhidro dibásico (Na2HPO4), 3.2 g de fosfato de sodio anhidro monobásico (NaH2PO4) y 90 g de cloruro de sodio (NaCl). Disolver en poco menos de 1 litro de agua destilada.
- Ajuste el pH a 7.4 y haga que la solución alcance un volumen final de 1L.
- Diluir 10X antes de usar y reajustar el pH si es necesario.
- Puede hacer una solución PBS que contenga 0.5 por ciento de Tween 20 agregando 5 ml de Tween 20 a la solución 1L.
Consejos para hacer PBS Buffer
Guarde el tampón a temperatura ambiente después de que usted & amp; apos; haya hecho la solución PBS.
Los reactivos no anhidro pueden ser sustituidos, pero usted y amp; apos; tendrán que recalcular la masa apropiada de cada uno a & amp; amp; nbsp; acomodar las moléculas de agua agregadas.
Usos de PBS Buffer
La solución salina tamponada con fosfato tiene muchos usos porque es & amp; apos; s & amp; amp; nbsp; isotónica y no tóxica para la mayoría de las células. Se puede usar para diluir sustancias y a menudo se usa para enjuagar contenedores de células. PBS puede usarse como diluyente en varios métodos para secar biomoléculas porque las moléculas de agua dentro de él se estructurarán alrededor de la sustancia & amp; # x2014; proteína, por ejemplo. Será & amp; quot; dried & amp; quot; & amp; amp; nbsp; e inmovilizado en una superficie sólida.
El pH permanece estable y consistente para evitar la destrucción de las células.& amp; amp; nbsp;
La película delgada de agua que se une a la sustancia previene la desnaturalización y amp; amp; nbsp; u otros cambios conformacionales. Los tampones de carbonato pueden usarse para el mismo propósito pero con menos efectividad.
PBS también se puede usar para tomar un espectro de referencia al medir la & amp; amp; nbsp; protein & amp; amp; nbsp; adsorción en ellipsometría.
& amp; # x203A; Ciencias
