Cómo hacer una solución de tampón de fosfato

El objetivo de una solución tampón es ayudar a mantener un pH estable cuando se introduce una pequeña cantidad de ácido o base en una solución. Una solución tampón fosfato es un tampón útil para tener, especialmente para aplicaciones biológicas. Debido a que el ácido fosfórico tiene múltiples constantes de disociación, puede preparar tampones de fosfato cerca de cualquiera de los tres pH, que están en 2.15, 6.86 y 12.32.1 & amp; # xFEFF; El tampón se prepara más comúnmente usando fosfato monosódico y su base conjugada, fosfato disódico.

Materiales de tampón de fosfato

• Fosfato monosódico
• Fosfato disódico
• Agua
• Ácido fosfórico para hacer que el pH sea más ácido o hidróxido de sodio para hacer que el pH sea más alcalino
• medidor de pH
• Cristalería
• Placa caliente con barra de agitación

Video destacado

Prepare el tampón de fosfato

1. Decidir sobre la concentración del tampón. Si crea una solución tampón concentrada, puede diluirla según sea necesario.&erio; # x200B;
2. Decida el pH de su tampón. Este pH debe estar dentro de una unidad de pH desde el pKa de la base ácida / conjugada. Por lo tanto, puede preparar un tampón a pH 2 o pH 7, por ejemplo, pero pH 9 lo estaría presionando.
3. Use la ecuación de Henderson-Hasselbach para calcular cuánto ácido y base necesita. Puede simplificar el cálculo si realiza 1 litro de búfer. Seleccione el valor de pKa que esté más cerca del pH de su tampón. Por ejemplo, si desea que el pH de su tampón sea 7, use el pKa de 6.9: pH = pKa + log ([Base] / [Acid])
   & lt; br & gt ;
   relación de [Base] / [Ácido] = 1.096
   & lt; br & gt ;
   La molaridad del tampón es la suma de las molaridades de la base ácida y conjugada o la suma de [Ácido] + [Base]. Para un búfer de 1 M (seleccionado para facilitar el cálculo), [Ácido] + [Base] = 1.
   & lt; br & gt ;
   [Base] = 1 – [Ácido].
   & lt; br & gt ;
   Sustituya esto en la proporción y resuelva :
   & lt; br & gt ;
   [Base] = 0.523 moles / L .
   & lt; br & gt ;
   Ahora resuelva para [Ácido]: [Base] = 1 – [Ácido], entonces [Ácido] = 0.477 moles / L. & lt; / br & gt ;
   & lt; / br & gt ;
   & lt; / br & gt ;
   & lt; / br & gt ;
   & lt; / br & gt ;
   & lt; / br & gt ;
4. Prepare la solución mezclando 0.477 moles de fosfato monosódico y 0.523 moles de fosfato disódico en un poco menos de un litro de agua.
5. Verifique el pH con un medidor de pH y ajuste el pH según sea necesario con ácido fosfórico o hidróxido de sodio.
6. Una vez que haya alcanzado el pH deseado, agregue agua para llevar el volumen total de tampón de ácido fosfórico a 1 L.
7. Si preparó este tampón como una solución madre, puede diluirlo para formar tampones en otras concentraciones, como 0.5 M o 0.1 M.

Ventajas y desventajas de los tampones de fosfato

Las dos ventajas clave de los tampones de fosfato son que el fosfato es altamente soluble en agua y que tiene una capacidad de amortiguación extremadamente alta. Sin embargo, estos pueden ser compensados por ciertas desventajas en algunas situaciones.

• Los fosfatos inhiben las reacciones enzimáticas.
• El fosfato precipita en etanol, por lo que puede usarse en preparaciones para precipitar ADN o ARN.
• Fosfatos secuestradores cationes divalentes (p. Ej., Ca2 + y Mg2 +).

& amp; amp; nbsp;

& amp; # x203A; Ciencias