El tampón TAE es una solución compuesta de base Tris, ácido acético y EDTA (Tris-acetato-EDTA). Históricamente es el tampón más común utilizado para la electroforesis en gel de agarosa en los análisis de productos de ADN resultantes de la amplificación de PCR, protocolos de purificación de ADN o experimentos de clonación de ADN.
Este tampón tiene baja resistencia iónica y baja capacidad de amortiguación. Es el más adecuado para la electroforesis de piezas de ADN grandes (& amp; gt; 20 kilobases) y deberá reemplazarse con frecuencia o recircularse durante tiempos de ejecución de gel más largos (& amp; gt; 4 horas). Con eso en mente, es posible que desee considerar hacer varios lotes del búfer.
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Dado que el búfer es fácil de hacer y los pasos se pueden llevar a cabo rápidamente, hacer que más de un lote a la vez no sea particularmente lento o difícil. Usando las instrucciones a continuación, debe tomar solo 30 minutos para hacer el búfer TAE.
Lo que necesita para el tampón TAE
Dado que hacer el búfer TAE solo requiere un conjunto rápido y simple de instrucciones, la cantidad de materiales necesarios para ello es excesiva. Usted & amp; apos; solo necesita EDTA (ácido etilendiaminotetraacético) sal disódica, base Tris y ácido acético glacial.
Hacer el tampón también requiere un medidor de pH y estándares de calibración, según corresponda. Usted & amp; apos; ll también necesita 600 mililitros y 1500 & amp; amp; nbsp; mililitros vasos o matraces, así como cilindros graduados. Finalmente, usted y amp; apos; necesitarán agua desionizada, barras de agitación y placas de agitación.
En las siguientes instrucciones, el peso de la fórmula (cada elemento y masa atómica de los Apos; se multiplica por el número de átomos, luego la masa de cada uno se suma) se abrevia como FW.
Prepare una solución madre de EDTA
Se prepara una solución EDTA con anticipación. EDTA no entrará completamente en una solución hasta que el pH se ajuste a aproximadamente 8.0. Para una solución madre de 500 mililitros de EDTA 0.5 M (molaridad o concentración), pese 93.05 gramos de sal disódica EDTA (FW = 372.2). Disuélvalo en agua desionizada de 400 mililitros y ajuste el pH con hidróxido de sodio (NaOH). Complete la solución a un volumen final de 500 mililitros.
Cree su solución madre
Haga una solución madre concentrada (50x) de TAE pesando 242 gramos de base Tris (FW = 121.14) y disolviéndola en aproximadamente 750 & amp; amp; nbsp; mililitros de agua desionizada. Agregue cuidadosamente 57.1 & amp; amp; nbsp; mililitros de ácido glacial y 100 & amp; amp; nbsp; mililitros de 0.5 M EDTA (pH 8.0).
Después de eso, ajuste la solución a un volumen final de 1 litro. Esta solución madre se puede almacenar a temperatura ambiente. El pH de este tampón no se ajusta y debe ser de aproximadamente 8.5.
Prepare una solución de trabajo de tampón TAE
La solución de trabajo del tampón 1x TAE se hace simplemente diluyendo la solución madre en 50x en agua desionizada. Las concentraciones finales de soluto son 40 mM (milimolar) de trisacetato y 1 mM de EDTA. El tampón ahora está listo para usar en la ejecución de un gel de agarosa.
Envoltura
Verifique el inventario antes de comenzar a asegurarse de tener todos los materiales anteriores para el búfer TAE. Su personal de suministros debe poder decirle si tienen todos los artículos que necesita en stock. Usted no quiere terminar perdiendo algo en el medio del procedimiento.
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